五種液相色譜法在這了，學(xué)到就是賺到
點擊次數(shù)：2115 更新時間：2019-10-12
液相色譜法按分離機(jī)制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
A.液固色譜法
使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是根據(jù)固定相對組分吸附力大小不同而分離。分離過程是一個吸附—解吸附的平衡過程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5~10?m。適用于分離分子量200~1000的組分，大多數(shù)用于非離子型化合物，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構(gòu)體。
B.液液色譜法
液液色譜法按固定相和流動相的極性不同分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC)。
正相色譜法———采用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相)；流動相為相對非極性的疏水性溶劑(烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時間。常用于分離中等極性和極性較的化合物(如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。
反相色譜法———一般用非極性固定相（如C18、C8）；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、、四氫呋喃等與水互溶的溶劑以調(diào)節(jié)保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用*為，據(jù)統(tǒng)計，它占整個HPLC應(yīng)用的80%左右。
C.離子交換色譜法
固定相是離子交換樹脂，常用苯乙烯與二乙烯交聯(lián)形成的聚合物骨架，在表面未端芳環(huán)上接上羧基、磺酸基（稱陽離子交換樹脂）或季氨基（陰離子交換樹脂）。被分離組分在色譜柱上分離原理是樹脂上電離離子與流動相中具有相同電荷的離子及被測組分的離子進(jìn)行逆交換，根據(jù)各離子與離子交換基團(tuán)具有不同的電荷吸引力而分離。
緩沖液常用作離子交換色譜的流動相。被分離組分在離子交換柱中的保留時間除跟組分離子與樹脂上的離子交換基團(tuán)作用弱有關(guān)外，它還受流動相的pH值和離子度影響。pH值改變化合物的解離程度，進(jìn)而影響其與固定相的作用，流動相的鹽濃度大，則離子度高，不利于樣品的解離，導(dǎo)致樣品較快流出。
離子交換色譜法主要用于分析酸、氨基酸、多肽及核酸。
D.離子對色譜法
又稱偶離子色譜法，是液液色譜法的分支。它是根據(jù)被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物后，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離改善。主要用于分析離子度大的酸堿物質(zhì)。分析堿性物質(zhì)常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽，如戊烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等。另外高氯酸、三氟乙酸也與多種堿性樣品形成很的離子對。
分析酸性物質(zhì)常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨、四丁基銨磷酸鹽。
離子對色譜法常用短鏈反相色譜柱柱（即C8），流動相為甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10mmol/L的離子對試劑，在的pH值范圍內(nèi)進(jìn)行分離。被測組分保時間與離子對性質(zhì)、濃度、流動相組成及其pH值、離子度有關(guān)。
E.排阻色譜法
固定相是有孔徑的多孔性填料，流動相是以溶解樣品的溶劑。小分子量的化合物以進(jìn)入孔中，滯留時間長；大分子量的化合物不能進(jìn)入孔中，直接隨流動相流出，它利用分子篩對分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。常用于分離高分子化合物，如組織提取物、多肽、蛋白質(zhì)、核酸等。
